我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關鍵環節。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結果重要的環節之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經驗是這樣的，細胞樣品例如一個六孔板的細胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復抽吸1分鐘左右，注意不要產生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。博來霉素誘導急性肺損傷小鼠模型。西藏C57動物模型

或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。以下結合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統，包括功能設備集成底座1和設置在功能設備集成底座1上的飼養倉2，所述飼養倉2具有無極調控微負壓裝置、高原低氧環境模擬裝置、高原光照環境模擬裝置15、高原溫度環境模擬裝置16、高原濕度環境模擬裝置17、動物行為學遠程觀察單元18，所述飼養倉2內設置有若干代謝籠3，飼養倉2前后箱體上設置有觀察窗4和若干操作窗5，飼養倉2左右箱體上分別設置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7，所述代謝籠3還包括設置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實施例的工作原理：本裝置的各個功能均通過設置在飼養倉2上的功能控制面板19控制，本裝置外形采用304不銹鋼，具有良好的氣密性。實驗動物送入飼養倉2內部后，關閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7，通過功能控制面板19實現飼養倉2內部環境模擬。江蘇C57動物模型構建動物模型的優越性主要表現在以下幾下方面。

可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細胞涂片以及某些薄膜組織的固定。（2）固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止組織、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同組織成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化，便于制作薄片（組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透力，能迅速的滲入組織內部；其次，不使組織過度收縮或膨脹，并能使組織內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質；，能使組織達到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對某些染料具有較強的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織，常需要特殊的固定液，取樣之前應做好準備。如眼球樣本應使用FAS眼球固定液，脂肪組織應使用脂肪組織固定液等。此外，在進行骨組織樣本制備的時候，還應注意提前進行脫鈣處理。

本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在視網膜色素變性性疾病研究中的應用。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發明的構建方法得到的動物模型其具有典型視網膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應用前景，例如將其用于研究視網膜色素變性性疾病的發病過程、發病機制，為深入了解研究視網膜色素變性性疾病提供基礎。又或者將其用于篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預后等。第三方面，本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物中的應用。在本發明方面提供了構建方法的基礎上，本領域技術人員容易想到將由該方法得到的視網膜色素變性疾病模型用于篩選預防或視網膜色素變性性疾病藥物或其他類似領域，這也是屬于本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述應用包括：向所述視網膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預防或視網膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后。骨質疏松癥是以骨量減少及骨組織微觀結構為特征的一種全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于發生骨折。

輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過針管對雙眼滴生理鹽水，改善金環電極及角膜的接觸效果。保證兩個金環電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號確認無誤后，關閉暗紅光。可以先嘗試記錄一下暗適應光強為·s/m2的erg檢測，確認一下信號的質量：如果雙眼的振幅出現了與預期不同的較大差異，建議再次檢查金環電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應光強為·s/m2的信號。需要注意的是，完成暗適應·s/m2光強檢測后，系統將自動打開背景光。同樣的，需要打開定時器，光適應10-15分鐘，再記錄。6經過光適應后，依次記錄光適應·s/m2以及·s/m2光強下波形，記錄·s/m2光強下閃爍視網膜誘發電位。結果發現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應和光適應條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導致視力受損(見圖5和圖6)。實施例4視網膜石蠟切片h&e染色：對4月齡小鼠的視網膜進行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規用二甲苯脫蠟。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。湖北動物模型手術

膽管結扎誘導炎癥性肝損傷和肝纖維化小鼠模型。西藏C57動物模型

其也是可以作為視網膜色素變性疾病模型的。以上所述為本發明的實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。sequencelisting四川省人民醫院利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用111406dna人工序列1gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttact60ggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcac120tgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaag180acatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtga240taaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaa300actctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaataca360taaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgc420atgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatg480tagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactca540cagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcg600tcttctagaacataaaaggacacatactgga。西藏C57動物模型