Co-IP實驗操作要點主要包括：1.樣品處理：確保樣品新鮮且未經(jīng)過多次凍融，以避免蛋白降解。對于組織樣本，應(yīng)在取樣后立即置于適當(dāng)?shù)谋４鏃l件下。2.抗體選擇：選擇特異性強(qiáng)的抗體，這是減少非特異性結(jié)合和背景噪聲的關(guān)鍵。3.抗體與磁珠偶聯(lián)：將抗體與磁珠充分偶聯(lián)，確保抗體能夠捕獲目標(biāo)蛋白。4.樣品與抗體-磁珠復(fù)合物結(jié)合：將處理好的樣品與抗體-磁珠復(fù)合物混合，確保目標(biāo)蛋白與抗體充分結(jié)合。5.洗滌：使用適當(dāng)?shù)南礈炀彌_液徹底洗滌磁珠，以去除非特異性結(jié)合的蛋白。6.洗脫與檢測：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液將目標(biāo)蛋白從磁珠上洗脫下來，并進(jìn)行后續(xù)的分析和檢測。7.遵循這些操作要點，可以確保Co-IP實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，為深入研究蛋白質(zhì)相互作用提供有力支持。免疫共沉淀法特異性強(qiáng)、可控性高，可用于研究蛋白互作，反映天然狀態(tài)，可逆且操作簡便。四川互作蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實驗是一種生物化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，用于檢測和鑒定在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的復(fù)合物。該實驗依賴于抗原-抗體特異性結(jié)合的原理，通過特定抗體來捕獲并富集與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物。在免疫共沉淀實驗中，首先需要將細(xì)胞或組織在適當(dāng)?shù)牧呀鈼l件下破碎，釋放出其中的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)中，許多會通過非共價鍵（如氫鍵、疏水作用、離子鍵等）或共價鍵（在某些情況下）相互作用形成復(fù)合物。然后，向裂解物中加入針對目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體，這些抗體會與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物。接下來，利用與抗體結(jié)合的親和劑（如ProteinA、ProteinG或特定種類的瓊脂糖珠），通過免疫親和反應(yīng)將抗原-抗體復(fù)合物捕獲并固定在固相支持物上。在經(jīng)過一系列洗滌步驟后，可以去除與固相支持物非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，從而將目標(biāo)蛋白質(zhì)及其相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物富集在固相支持物上。通過適當(dāng)?shù)南疵摲椒▽⒏患牡鞍踪|(zhì)復(fù)合物從固相支持物上洗脫下來，并進(jìn)行后續(xù)的分析。上海免疫共沉淀CoIP massCo-IP技術(shù)可靠但需注意潛在限制，選特異性抗體、控制條件，多方法驗證提升準(zhǔn)確性！
Co-IP（免疫共沉淀）實驗注意事項眾多，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。首先，抗體的選擇至關(guān)重要，必須選擇特異性強(qiáng)的抗體，避免非特異性結(jié)合導(dǎo)致背景噪聲。其次，樣品的處理過程需要嚴(yán)格控制，確保樣品純度和完整性，減少雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對結(jié)果的影響。實驗過程中，操作細(xì)節(jié)也需特別注意，如避免抗體過量使用，確保洗滌步驟充分，以去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。此外，實驗條件的選擇和優(yōu)化同樣重要，包括pH值、離子濃度、溫度等因素，都可能影響實驗結(jié)果。另外，結(jié)果的驗證和重復(fù)實驗也是必不可少的，通過不同抗體或?qū)嶒灄l件的重復(fù)實驗，或使用其他方法進(jìn)行驗證，如質(zhì)譜技術(shù)，以提高結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。總之，Co-IP實驗需要注意抗體選擇、樣品處理、操作細(xì)節(jié)、實驗條件以及結(jié)果驗證等多個方面，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種在生物藥物領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)通過利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白與其相互作用的蛋白一同沉淀下來，從而揭示蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系。在藥物研發(fā)中，Co-IP技術(shù)被用于靶標(biāo)識別和驗證，幫助研究人員鑒定藥物與特定蛋白質(zhì)相互作用的分子機(jī)制，驗證潛在藥物靶點，并評估候選藥物分子的有效性和選擇性。此外，該技術(shù)也在疾病發(fā)生機(jī)制和生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)中發(fā)揮著重要作用，能夠鑒定與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，識別新的藥物靶點，并發(fā)現(xiàn)潛在的生物標(biāo)志物用于早期診斷和疾病監(jiān)測。免疫共沉淀實驗涵蓋樣品處理、抗體處理、共沉淀、洗滌及蛋白鑒定，確保精確檢測蛋白相互作用。
IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）是一種常用的實驗方法，用于驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用。在IP-WB實驗中，首先使用特異性抗體將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞或組織裂解液中免疫沉淀下來。這一步驟確保了只有與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)被富集。隨后，將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，使蛋白質(zhì)按照分子量大小分離。接著，通過Western Blot技術(shù)，利用特異性抗體檢測目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。Western Blot利用抗體與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合，通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白，從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)相互作用的驗證。IP-WB技術(shù)結(jié)合了免疫沉淀的高特異性與Western Blot的高靈敏度，能夠有效地驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用，并為進(jìn)一步的功能研究和藥物開發(fā)提供有力支持。IP-Mass技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法。上海免疫共沉淀CoIP mass
Co-IP技術(shù)持續(xù)創(chuàng)新，提升靈敏度和高通量，助力蛋白互作研究！四川互作蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測
結(jié)合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結(jié)合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物從Beads上洗脫下來，得到免疫共沉淀（Co-IP）產(chǎn)物。Co-IP產(chǎn)物既可以用WesternBlot檢測已知蛋白，也可以用質(zhì)譜鑒定未知蛋白。當(dāng)沒有合適的誘餌蛋白抗體時，還可以通過表達(dá)融合了Flag標(biāo)簽的誘餌蛋白，利用Flag標(biāo)簽抗體做免疫沉淀。即樣本過表達(dá)Flag-Bait，經(jīng)裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結(jié)合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經(jīng)洗滌、洗脫后，用WB或質(zhì)譜檢測。四川互作蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測