根據gm20541的cdna序列設計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3；(g)以提取的cdna為模板，進行rt-pcr。擴增后進行電泳。結果見圖4中b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541在gm20541基因敲除純合子小鼠的視網膜中表達量降低。圖4的b中ctrl是指野生型對照，sixko是指gm20541基因敲除純合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表達水平相對變化，以野生型表達水平為1。實施例3對4月齡的gm20541基因敲除純合子小鼠進行erg視力檢測：1暗適應動物應整夜暗適應，環境應做到沒有光線；2次日麻醉：稱重，腹腔內注射；宜深度麻醉；3動物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗紅光照明下將小鼠用膠帶固定在動物試驗平臺的前方：需保證小鼠正"趴"，即相對于閃光刺激器的刺激口，雙眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳劑。4電極安裝：將視網膜電圖儀(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)預熱后，在耳夾電極涂上導電膏，夾尾巴，插入放大器“地”接口；雙頭的針電極插入后頸皮(大約在兩耳中間)，同時接兩個通道的“負”接口；金環電極夾在動物實驗平臺的電極支架上，仔細調整其角度。博來霉素誘導急性肺損傷小鼠模型。北京腦定位動物模型實驗

技術實現要素：本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用，采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型，該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發病過程及機制，并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的：方面，本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。上海動物模型建模LPS脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型。

再向老師、師兄師姐學習經驗和技術，如果實驗平臺的儀器需要提前預約，建議提前規劃好使用的時間。反復總結尋找答案在整個預實驗的過程中可能會出現很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當、腹腔注射操作失誤、物使用不當等引起動物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導師、師兄師姐、文獻、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥，發現有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復嘗試調整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發現是動物體重秤的準度有問題，導致體重秤得不準。因此，需要自己反復琢磨到底是實驗過程中哪一個環節出現問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標準化，統一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，建議每日總結，大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復總結出每天實驗的優缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復模擬，準備好相關工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節奏和個人心情。筆者曾經灌胃操作的時候發現藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準備，那真叫一個郁悶。仔細記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士。

技術實現要素：本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用，采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型，該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發病過程及機制，并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的：方面，本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內，作為轉錄因子調控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多，對其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統發育疾病dandy-walker復合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關。此外，znf124被認為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動中承擔有重要功能。發明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關，對探索rp的致病機制有極大幫助。因此，深入研究znf124對視網膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。四氯化碳誘導急性肝損傷大鼠模型。

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應)不大于8毫米，我習慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節可能有些同學沒注意到，就是ECL發光液要與HRP反應一分鐘后顯影效果才會更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。控制原發病，遏制其誘導的全身失控性炎癥反應，是預防和ALI/ARDS的必要措施。云南兔動物模型構建

通過高脂飲食誘導構建非酒精性脂肪肝模型。北京腦定位動物模型實驗

實驗樣本分類實驗一般采取樣本有：血液樣本、組織樣本和細胞樣本。通常，組織樣本采集后，應立即用等滲溶液（PBS或生理鹽水）盡量把血液漂洗干凈（除非血液也是分析對象），用濾紙或紗布吸干，把樣本分切成幾分，每份的體積約2個黃豆大小，每份用一個管子裝。血液樣本的采集應根據不同實驗的要求，將會采取不同策略。血清樣本：全血中不加抗凝劑，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。（全血標本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min）血漿樣本：全血中加抗凝劑，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。（可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃，3000rpm/min離心15min）如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清，根據獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管，可避免反復凍融造成的檢測誤差。生化：建議優先選擇血清，其次選擇肝素抗凝血漿；ELISA：建議優先選擇血清，其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿；凝血實驗：只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿；血常規：只能選擇EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白細胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管，防止表面抗原的丟失，或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。北京腦定位動物模型實驗