一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應，穩定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環節也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。骨質疏松癥是以骨量減少及骨組織微觀結構為特征的一種全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于發生骨折。上海C57動物模型

經多級乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結果發現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，sixko小鼠的視網膜外核層已經開始變薄，表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。湖南腦定位動物模型手術小鼠膽管結扎誘導炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。

小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張；用無菌手術刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次采，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結束后，按壓傷口或使用止血劑來止血；每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘取；同時用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當血液流盡時，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉，大鼠翻正反射消失時不在繼續麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側皮膚，使眼球突出，毛細管從內側的眼球與眼瞼的縫隙處進入，輕輕旋轉毛細管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時候4-5滴即可，溫柔的將毛細管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側平躺在手術板上固定；左側第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動明顯，慢慢進針；針有回血停止進針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。

可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細胞涂片以及某些薄膜組織的固定。（2）固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止組織、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同組織成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化，便于制作薄片（組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透力，能迅速的滲入組織內部；其次，不使組織過度收縮或膨脹，并能使組織內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質；，能使組織達到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對某些染料具有較強的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織，常需要特殊的固定液，取樣之前應做好準備。如眼球樣本應使用FAS眼球固定液，脂肪組織應使用脂肪組織固定液等。此外，在進行骨組織樣本制備的時候，還應注意提前進行脫鈣處理。高脂飼料致高脂血癥大鼠模型。

痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠，雄性，周齡6~8W，體重：200~250g【方法】1、大鼠麻醉，顱頂脫毛備皮；2、大鼠腦定位儀固定大鼠，顱頂正中切口，長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫；3、縫線將皮膚左右分開固定，前囟后10mm、矢狀縫左側；4、微量注射器移至開孔處修正骨孔，注射器垂直向顱內插入，緩慢注射無水乙醇15ul，注射完移除注射器，棉球壓迫止血；5、縫合創口后維持25°體溫，等待蘇醒，觀察大鼠狀態。【觀察】術后3天模型大鼠攝食減少、右側肢體跛行、右前肢不負重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯，順時針繞圈前行，2周后癥狀減輕，大鼠于術后4周開始給予動物行為學觀察【檢測】HE檢測對比觀察腦組織是否出現細胞水腫,排列不規則,結構紊亂,核固縮,染色體分布不均勻,變性壞死,核糖體消失,白質軟化灶和空囊形成,小膠質細胞浸潤,星形膠質細胞肥大、增生等病理表現。曠場測試（OpenFieldTest）：實驗用于評估大小鼠的活動性和探索性行為。動物被放置在一個較大的開放性場地內，然后記錄它們的運動軌跡和停留時間。用來評估動物的活動性、焦慮程度、壓力反應等。水迷宮測試。小鼠腎纖維化（UUO）模型建立。湖北乳鼠動物模型服務

用血管內線栓阻斷法制備大鼠 MCAO模型。已被腦血管病研究者接受和采用。上海C57動物模型

e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖b波統計；scotopicamplitude：暗光測定峰值；flashintensity：閃光強度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應視網膜電圖(erg)檢測結果；圖中：a-b：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖軌跡圖；d：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖a波統計；e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖b波統計；f：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖統計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜切片免疫組化染色結果；小鼠年齡：4個月；os：outer-segment(外節)；is：inner-segment(內節)；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內核層)；圖中：a：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜石蠟切片的h&e染色結果，外核層及內核層均變薄；b：對不同部位的gm20541敲除鼠視網膜外核層厚度統計。圖8：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結果。上海C57動物模型