相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視力提高；(2)施用所述候選藥物后，相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外核層變厚；(3)施用所述候選藥物后，相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外節增長。第四方面，本發明實施例提供了一種視網膜色素變性疾病模型的繁育方法，其包括：將由如上所述的方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交。在由方面所述的構建方法得到了視網膜色素變性疾病模型的基礎上，為了獲得更多的視網膜色素變性疾病模型，本領域技術人員容易想到直接將上述的構建方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交以繁育或培育出更多數量的視網膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發明的保護范圍。附圖說明為了更楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1：檢測gm20541基因在不同組織中的表達；圖中：a：rt-pcr檢測gm20541基因在不同組織的表達結果。急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。江蘇皮下成瘤動物模型建模

轉基因小鼠對黑色素瘤發生的分子途徑的理解有重要意義。此外，轉基因小鼠是可靠且可重現的模型，用來評估受損基因對黑色素瘤生物學的影響。應用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變在黑色素瘤的發生和發展的重要性及藥物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，為膠原原纖維形成的關鍵調節劑。黑色素瘤中Lumican表達降低與浸潤相關。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導入胚胎干細胞，建立Lum－/－轉基因小鼠。該模型可提供與發生和轉移相關機制及可見變的進展，以及確定負責的黑色素瘤進展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉基因小鼠方法：有研究者使用突變的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K構建體，并注射到卵母細胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K轉基因小鼠。3BrafV600E轉基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術從內源性Braf基因中誘導BrafV600E表達，建立BrafV600E轉基因黑色素瘤小鼠模型。總結目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于實驗動物與人類基因組、基因調控、細胞類型、結構與組成等方面是有一定差別。實驗動物模型造模可以克服人類某些疾病潛伏期長，病程長和發病率低的缺點。

我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關鍵環節。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結果重要的環節之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經驗是這樣的，細胞樣品例如一個六孔板的細胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復抽吸1分鐘左右，注意不要產生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。

省心省時一些基因編輯鼠模型表型不易發現，需要結合外科手術造模、物理刺激或藥物誘導才能發現表型。專業的手術模型團隊結合成熟穩定的基因修飾鼠平臺和飼養繁育平臺，賽業生物可為您提供一站式“基因編輯鼠模型制備——種群擴繁——手術造模——表型驗證”服務，讓您省心省時。3.專業的技術支持賽業生物專業的小動物外科手術團隊熟練掌握多種模型的制備，具備建立復雜及復合手術疾病模型的能力，可能夠根據您的需求，制定合理的實驗計劃，同時提供及時的項目匯報與售后服務，讓您省事省心。，確保動物福利與質量標準與國際接軌賽業模式動物中心通過ISO9001:2015和AAALAC雙認證，ISO9001:2015認證確保向廣大學者提供的所有產品和技術服務符合國際標準，AAALAC認證表明了賽業生物尊重動物福利和倫理，重視生物安全的負責態度。適用動物品種：大鼠、小鼠。手術疾病模型團隊首席科學家簡介張榮利博士張榮利博士有二十多年小鼠手術疾病模型制備經驗，畢業后先后在中國中醫科學院、清華大學、北京大學及國際學術機構任職，2011年起在美國CaseWesternReserveUniversity工作，任ResearchScientist并擔任心血管生理學實驗室主任，負責基因工程動物的疾病表型發現與新藥臨床前研究。SD大鼠腦缺血模型建立。

所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d，可以看出，通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物，對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明，gm20541基因敲除的路線如圖2所示，具體操作如下：基因敲除小鼠獲取步驟：1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子；2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換，得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞；3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2)；4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定：實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果，擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r，擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。因此，外科結扎膽總管并使膽總管完全阻塞已成為引起嚙齒動物梗阻性膽汁淤積性損傷的常用模型。湖南高脂高糖動物模型

裸鼠皮下成瘤：前肢近腋后皮下注射細胞懸液； 裸鼠原位瘤：胰腺成瘤；尾靜脈注射成瘤。江蘇皮下成瘤動物模型建模

經多級乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結果發現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，sixko小鼠的視網膜外核層已經開始變薄，表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。江蘇皮下成瘤動物模型建模