METTL3能夠促進肺腺細(xì)胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調(diào)節(jié)器或效應(yīng)器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細(xì)胞白血病（AML）患者中，m(6)A調(diào)控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系，且m(6)A調(diào)控基因的改變與AML不良預(yù)相關(guān)[26]。此外，F(xiàn)TO在AML中高表達，它通過降低mRNA轉(zhuǎn)錄本中的m(6)水平，調(diào)節(jié)ASB2和RARA等靶點的表達，增強了白血病基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的AML細(xì)胞分化[27]。在脂肪形成過程中，F(xiàn)TO表達與m6A水平成負(fù)相關(guān)，促進脂肪形成[3]。在膠質(zhì)細(xì)胞瘤樣細(xì)胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導(dǎo)FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[28]。此外，甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3或METTL14的敲除，能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達，極大地促進了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導(dǎo)的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關(guān)的甲基化、去甲基化酶和識別蛋白的功能，進而研究m6A修飾的生物學(xué)功能和作用機制：一般通過敲除m6A酶分子，研究下游功能基因分子的表達和m6A甲基化情況，通過介導(dǎo)相關(guān)基因異常（可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調(diào)控）影響細(xì)胞表型和功能特征。幫助科研人員深入理解疾病的共同性，還為新藥研發(fā)、疫苗測試等提供了有效的平臺。黑龍江疾病模型科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)

m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動態(tài)發(fā)布時間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一,Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一，目前主要的研究思路包括差異表達的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測全轉(zhuǎn)錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機制研究。而在7月25日的Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章，小編時間和大家分享一下。作者開發(fā)這一方法的前提是有研究報道了MazF能特異性的識別無修飾的ACA序列并發(fā)揮RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的個A發(fā)生m6A甲基化之后將無法被MazF所識別，如圖一所示。圖1MazFRNA酶作用示意圖根據(jù)這一原理，作者將純化后的mRNA進行MazF酶處理，然后再對打斷的RNA進行逆轉(zhuǎn)建庫測序。對于無修飾的位點，ACA處被完全剪切，測序reads正好分布于該位點上下游而且比對至該處的上下游reads數(shù)是相同的.如圖2所示。而甲基化位點的reads會包含上下游的序列。作者開發(fā)了MAZTER-MINE軟件包專門進行分析（圖3）。組織科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心，它包含了遺傳物質(zhì)DNA，控制著細(xì)胞的生長和分裂。

3）基因/蛋白質(zhì)表達定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要，因此在取樣過程中，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過程，將會導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無差別降解，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測結(jié)果。在條件允許的情況下，樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi)，并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的。針對蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶劑進行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChnReaction，PCR）及免印跡（Westernblotting，WB），這兩種實驗手段是分子學(xué)檢測中不可或缺的一部分，也是發(fā)表至關(guān)重要的分子檢測數(shù)據(jù)。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進行定性或定量檢測，而WB則主要用來對某一蛋白質(zhì)的表達進行定量檢測。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測隨著檢測水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學(xué)檢測的價格降低，實驗設(shè)計中也常常運用組學(xué)檢測來提升實驗設(shè)計的檔次。在我們進行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測過程中，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習(xí)慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等是研究的重要表型，是分子生物學(xué)和藥理學(xué)研究解決的問題之一。

這種細(xì)胞保持著其原始的生物學(xué)特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細(xì)胞在許多生物醫(yī)學(xué)研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發(fā)等。原代細(xì)胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細(xì)胞脫離了它們在生物體中的環(huán)境，但是仍然保持著其基本的生物學(xué)特性，包括細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞器以及其他重要的生物分子。原代細(xì)胞在未經(jīng)過傳代培養(yǎng)的情況下，保持著其原始的生物學(xué)特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學(xué)研究等。同時，由于原代細(xì)胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫(yī)學(xué)中，如皮膚移植、骨頭修復(fù)和神經(jīng)再生等。此外，原代細(xì)胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色。由于原代細(xì)胞具有更高的生物真實性，使用它們建立的疾病模型能夠更準(zhǔn)確地模擬疾病的發(fā)展過程和藥物的作用機制，從而為新藥研發(fā)和疾病治、療提供更有效的工具。總之，原代細(xì)胞是一種具有高度活性和分裂能力的細(xì)胞，在生物醫(yī)學(xué)研究中具有重要的作用。由于其原始的生物學(xué)特性。可以幫助科研人員深入理解疾病的共同性，即不同物種之間存在的共有病理變化過程。乳鼠科研技術(shù)服務(wù)實驗室

EdU細(xì)胞增殖檢測是一種新型的細(xì)胞增殖檢測方法。黑龍江疾病模型科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)

建議按照2×106每孔的數(shù)量將293T細(xì)胞均勻鋪入。(2)第二天：在24小時之內(nèi)，觀察293T細(xì)胞的匯合度在90%~95%之間時，向其中加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體，DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體制備方法如下：a)輕輕混勻LipoMax，根據(jù)說明書加入相應(yīng)量于500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b)在500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中稀釋DNA，總質(zhì)量為15μg按照載體質(zhì)粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復(fù)合體。(3)將DNA-LipoMax復(fù)合體輕柔地滴加至細(xì)胞培養(yǎng)皿中，輕輕搖晃培養(yǎng)皿混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(4)病毒收集濃縮病毒：加入DNA-LipoMax復(fù)合體48小時后，收集病毒上清，同時加入10ml預(yù)溫的293T培養(yǎng)基到細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將收集到的病毒上清存在4℃冰箱中;收集72小時病毒上清，與48小時病毒上清混在一起。將離心機溫度降溫到4℃，600g，離心5分鐘，去除其中的細(xì)胞碎片，上清液經(jīng)μm濾頭過濾，加入病毒濃縮液，配制濃縮病毒液。將濃縮后的病毒放于4℃冰箱搖床上，旋轉(zhuǎn)過夜。第二天，4度離心機，3000~4000g離心15分鐘。棄掉上清液，加入1Xpbs或培養(yǎng)基重懸。黑龍江疾病模型科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)