結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。小鼠腎纖維化（UUO）模型建立。湖北動物模型實驗

動物疾病模型在人類重大疾病研究和新藥創制等方面具有不可替代的重要作用和價值。與自發性疾病動物模型和環境誘導、物理因素、藥物誘導的疾病動物模型相比，手術模型操作復雜、技術門檻高，因此也存在相應的一些問題，如缺乏標準化流程、穩定性差、實驗室之間數據可比性較差。即便是同一個實驗室，重復性也是一個很大的挑戰。所以實現手術疾病模型的標準化、規范化和重復性仍然是該領域長期的目標。針對這一現狀，賽業生物利用多年積累的的堅實經驗、高效的團隊組建及管理經驗，歷經兩年籌備，打造了一支技術過硬的小鼠手術模型服務團隊，熟練掌握多種模型的制備，具備建立復雜及復合手術疾病模型的能力。我們以項目“可重復”作為金標準，對于客戶復雜的項目需求或文獻未見、少見的疾病模型，我們會與客戶緊密協作，認真理解和把握需求，制定科學合理的手術模型造模方案。希望我們提供的專業且穩定的手術模型服務可以節省您的時間和精力，讓您可以聚焦到科學創新性的工作上來。服務優勢1.以實驗“可重復”作為服務標準我們以實驗“可重復”作為金標準，對技術團隊進行大量的手術模型操作訓練，確保疾病模型多個批次之間數據的穩定性。2.一站式服務。上海C57動物模型建模大鼠面癱模型的建立。

SD大鼠腦缺血致腦梗死模型【材料】水合氯醛、線栓直徑（體重250-300g）【方法】1、10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。2、仰臥位固定，頸正中線切口，分離肌肉和筋膜，分離左側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內動脈（ICA）。3、微動脈夾暫時夾閉頸內動脈（ICA），活扣結扎近心端頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）打雙結，在雙結中間剪開小口插入線栓。4、將拴線插入到頸內動脈（ICA），用眼科鑷輕推拴線，以頸外動脈（ECA）和頸內動脈（ICA）分叉處為參考位置。5、栓線插入預刻深度，感到有阻力，說明栓線已到達腦中動脈（MCA）,打結固定栓線。6、血管外的栓線不要留得過長，1h后拔出栓線，縫合傷口，單籠飼養觀察。注：前兩三天老鼠會萎靡，不進食，注意不要，老鼠無死亡即可。

所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d，可以看出，通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物，對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明，gm20541基因敲除的路線如圖2所示，具體操作如下：基因敲除小鼠獲取步驟：1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子；2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換，得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞；3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2)；4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定：實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果，擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r，擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。博萊霉素是具有多種抗腫瘤作用的多組分，其毒副作用之一是引起肺纖維化。

四氯化碳誘導急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機分配至2組中，每組5只，正常喂食喂水7d后進行試驗；2、大鼠體重為200g±10g，按組別給予藥物：生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進行相關檢測（注：注射前按比例混合四氯化碳：橄欖油=1：）【評定】給予四氯化碳后TP含量下降，ALT和AST含量上升【檢測】生理鹽水組肝索結構清晰，血管內無淤血，血管周圍無炎癥病灶，肝小葉結構清晰；給予四氯化碳后肝索排列紊亂，結構不清，存在大量壞死區域且肝索結構消失，有大小不一的空泡結構，多數血管內有淤血并伴有粉染蛋白樣物質，血管周圍有炎癥反應灶，少量紅細胞滲出；西維來司鈉介入后肝索排列不清晰，存在部分壞死區域且肝索結構消失，有大小不一的空泡結構，少數血管內有淤血并伴有粉染蛋白樣物質，血管周圍有炎癥反應灶，極少量紅細胞滲出。骨質疏松癥是目前世界上發病率、死亡率和醫療保健消耗較大的疾病之一，已成為全世界范圍的嚴重的社會問題。北京皮下成瘤動物模型飼養

采用復合改良法造模,是目前 IgA 腎病中較為可靠、穩定、成功率高,且病理、臨床指標近人類 IgA 腎病的動物模型。湖北動物模型實驗

其也是可以作為視網膜色素變性疾病模型的。以上所述為本發明的實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。sequencelisting四川省人民醫院利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用111406dna人工序列1gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttact60ggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcac120tgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaag180acatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtga240taaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaa300actctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaataca360taaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgc420atgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatg480tagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactca540cagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcg600tcttctagaacataaaaggacacatactgga。湖北動物模型實驗