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浙江組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-08-26

科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動(dòng)移液器|單道電動(dòng)移液器|多道手動(dòng)移液器多道電動(dòng)移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲(chǔ)瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長(zhǎng)頸)燒瓶|碘測(cè)定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲(chǔ)存管|凍存管|反應(yīng)管聚乙烯保存管|細(xì)胞培養(yǎng)管|自動(dòng)上樣管|其它PCR耗材PCR管|PCR條板|PCR板|實(shí)時(shí)定量PCR毛細(xì)管其它微孔板微孔板(96孔)|微孔板(384孔)|微孔板。這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原,并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性,來(lái)進(jìn)行研究。浙江組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

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原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液,其中蘇木精堿性染液為藍(lán)色,可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色(細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色;軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán);粘液呈灰藍(lán));伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子,易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細(xì)胞漿染色。細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計(jì)、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)進(jìn)行麻醉,頸椎脫臼法處死小鼠,取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織,切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水(1)將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下,使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次,每次5min。(2)卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水,各30min。(3)再放入95%、100%乙醇溶液各2次,每次20min。3、透明、透蠟(1)使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。黑龍江豚鼠科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)盡管存在挑戰(zhàn),動(dòng)物疾病模型的發(fā)展前景仍然值得期待。

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采用opti-MEM和Lipo3000分別轉(zhuǎn)染含有目的基因的pMSCV-eGFP、VSV、GAG質(zhì)粒及對(duì)照載體,每皿加入脂質(zhì)體-質(zhì)粒轉(zhuǎn)染混懸液按購(gòu)買脂質(zhì)體相關(guān)說明書操作定量。繼續(xù)培養(yǎng)24h。2)24小時(shí)后,將培養(yǎng)基更換為新鮮的DMEM完全培養(yǎng)基,放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48~72h。3)48~72h后收集上層培養(yǎng)液,并過μm濾膜,采用ELISA法對(duì)所獲得的慢載體進(jìn)行滴度測(cè)定。如不及時(shí)使用可以凍存于-80℃。3、慢轉(zhuǎn)染1)轉(zhuǎn)染前1天將細(xì)胞接種6孔培養(yǎng)板,時(shí)細(xì)胞的融合率約為50%,前需換液,加入1mLDMEM完全培養(yǎng)基。2)冰浴融化后加入相應(yīng)體積的液及聚凝胺(Polybrene),混勻后放入37℃孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)3)4h后補(bǔ)充1mL培養(yǎng)基,14h后換液(24h內(nèi)換液即可)。4)72h后用倒置顯微鏡觀察熒光,監(jiān)測(cè)效率,出現(xiàn)較多熒光時(shí)將等量的轉(zhuǎn)染細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞分別加入等濃度Puromycin(Puromycin或其他篩選濃度需要事先摸索)。5)待未轉(zhuǎn)染細(xì)胞全部死亡并且可觀察到滿意熒光量時(shí),降低Puromycin濃度培養(yǎng)。也可以挑去單克隆細(xì)胞株進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng),以得到滿意的穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測(cè)目的基因的表達(dá)量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細(xì)胞株:a.正常細(xì)胞株;b.空載載體的細(xì)胞株。

如胰腺,一般取胰島較多的胰腺尾部;肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集,采集順序應(yīng)按照:消化,神經(jīng)系統(tǒng),皮膚,肌肉等的順序進(jìn)行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排,然后決定其切面的走向;如一長(zhǎng)管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等,應(yīng)盡可能掉,否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來(lái)一些不必要的問題。樣品的固定(1)固定的方法:①小塊固定法:從動(dòng)物取下的小塊,立即置入液態(tài)固定劑(這是應(yīng)用經(jīng)常的方法)。②注射/灌注固定法:某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定,這時(shí)宜采用注射固定法,將固定液注入血管,經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)和全身,從而得到充分的固定。另,空腔比如肺,肺內(nèi)含有空氣,固定液難以滲入,建議先做肺灌注,使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存,如果空腔中氣體沒有排出,后續(xù)可能影響固定效果(沒有灌注的肺會(huì)浮在液體表面不利于固定,切片以后也會(huì)看到很多的空泡)。③蒸汽固定法:比較細(xì)小而薄的標(biāo)本,可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜的固定。。生物分子學(xué)是研究生命體系中分子結(jié)構(gòu)、功能和相互作用的學(xué)科。

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實(shí)驗(yàn)樣本分類實(shí)驗(yàn)一般采取樣本有:血液樣本、樣本和細(xì)胞樣本。通常,樣本采集后,應(yīng)立即用等滲溶液(PBS或生理鹽水)盡量把血液漂洗干凈(除非血液也是分析對(duì)象),用濾紙或紗布吸干,把樣本分切成幾分,每份的體積約2個(gè)黃豆大小,每份用一個(gè)管子裝。血液樣本的采集應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的要求,將會(huì)采取不同策略。血清樣本:全血中不加抗凝劑,血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。(全血標(biāo)本室溫放置2小時(shí)3000rpm/min離心15min)血漿樣本:全血中加抗凝劑,血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。(可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,3000rpm/min離心15min)如果是做生化\ELISA等檢測(cè)可以考慮血漿和血清,根據(jù)獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管,可避免反復(fù)凍融造成的檢測(cè)誤差。生化:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;ELISA:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;凝血實(shí)驗(yàn):只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;血常規(guī):只能選擇EDTA抗凝全血;如果要收集其中的白細(xì)胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管,防止表面抗原的丟失,或者盡快安排就近檢測(cè)。樣本處理取樣完后。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型按產(chǎn)生原因分為以下5類:自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型模型、遺傳工程模型、醫(yī)學(xué)模型陰性模型。寧夏大鼠科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建

腫瘤細(xì)胞具有極強(qiáng)的增殖能力,在一個(gè)適宜,裸鼠成瘤是常見的驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞體內(nèi)增殖模型。浙江組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

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