四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機(jī)分配至2組中，每組5只，正常喂食喂水7d后進(jìn)行試驗(yàn)；2、大鼠體重為200g±10g，按組別給予藥物：生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)（注：注射前按比例混合四氯化碳：橄欖油=1：）【評(píng)定】給予四氯化碳后TP含量下降，ALT和AST含量上升【檢測(cè)】生理鹽水組肝索結(jié)構(gòu)清晰，血管內(nèi)無(wú)淤血，血管周?chē)鸁o(wú)炎癥病灶，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰；給予四氯化碳后肝索排列紊亂，結(jié)構(gòu)不清，存在大量壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，多數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周?chē)醒装Y反應(yīng)灶，少量紅細(xì)胞滲出；西維來(lái)司鈉介入后肝索排列不清晰，存在部分壞死區(qū)域且肝索結(jié)構(gòu)消失，有大小不一的空泡結(jié)構(gòu)，少數(shù)血管內(nèi)有淤血并伴有粉染蛋白樣物質(zhì)，血管周?chē)醒装Y反應(yīng)灶，極少量紅細(xì)胞滲出。通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。江蘇高脂高糖動(dòng)物模型服務(wù)

    技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用，采用該構(gòu)建方法可以得到視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，該模型可表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發(fā)病過(guò)程及機(jī)制，并為該疾病的或預(yù)防提供新的靶標(biāo)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標(biāo)動(dòng)物視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類(lèi)具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)基因調(diào)控起重要的作用。znf124蛋白可穿過(guò)核孔進(jìn)入核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控其他基因的表達(dá)。目前針對(duì)znf124蛋白功能的研究報(bào)道并不多，對(duì)其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統(tǒng)發(fā)育疾病dandy-walker復(fù)合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關(guān)。此外，znf124被認(rèn)為參與了前體生長(zhǎng)因子(vegf)對(duì)人造血細(xì)胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動(dòng)中承擔(dān)有重要功能。發(fā)明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關(guān)，對(duì)探索rp的致病機(jī)制有極大幫助。因此，深入研究znf124對(duì)視網(wǎng)膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。北京模式動(dòng)物模型飼養(yǎng)致使腎小球系膜這以 IgA 為主的免疫復(fù)合物沉積,同時(shí)使系膜細(xì)胞增生,基質(zhì)增多。

    可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜組織的固定。（2）固定的目的①保持其原有狀態(tài)：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與，防止細(xì)胞過(guò)度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，使之盡量保持生前的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同組織成分對(duì)染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化，便于制作薄片（組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過(guò)程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類(lèi)：一類(lèi)是單純固定液，即只有一種試劑；另一類(lèi)是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應(yīng)有下列特性，首先，有強(qiáng)滲透力，能迅速的滲入組織內(nèi)部；其次，不使組織過(guò)度收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；，能使組織達(dá)到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對(duì)某些染料具有較強(qiáng)的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織，常需要特殊的固定液，取樣之前應(yīng)做好準(zhǔn)備。如眼球樣本應(yīng)使用FAS眼球固定液，脂肪組織應(yīng)使用脂肪組織固定液等。此外，在進(jìn)行骨組織樣本制備的時(shí)候，還應(yīng)注意提前進(jìn)行脫鈣處理。

    輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過(guò)針管對(duì)雙眼滴生理鹽水，改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個(gè)金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號(hào)確認(rèn)無(wú)誤后，關(guān)閉暗紅光。可以先嘗試記錄一下暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的erg檢測(cè)，確認(rèn)一下信號(hào)的質(zhì)量：如果雙眼的振幅出現(xiàn)了與預(yù)期不同的較大差異，建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的信號(hào)。需要注意的是，完成暗適應(yīng)·s/m2光強(qiáng)檢測(cè)后，系統(tǒng)將自動(dòng)打開(kāi)背景光。同樣的，需要打開(kāi)定時(shí)器，光適應(yīng)10-15分鐘，再記錄。6經(jīng)過(guò)光適應(yīng)后，依次記錄光適應(yīng)·s/m2以及·s/m2光強(qiáng)下波形，記錄·s/m2光強(qiáng)下閃爍視網(wǎng)膜誘發(fā)電位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應(yīng)和光適應(yīng)條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導(dǎo)致視力受損(見(jiàn)圖5和圖6)。實(shí)施例4視網(wǎng)膜石蠟切片h&e染色：對(duì)4月齡小鼠的視網(wǎng)膜進(jìn)行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。可以克服人類(lèi)某些疾病潛伏期長(zhǎng)，病程長(zhǎng)和發(fā)病率低的缺點(diǎn)。

    表明在gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外節(jié)變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4',6-diamidino-2-phenylindole)：細(xì)胞核染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質(zhì)抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買(mǎi)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實(shí)施例11采用rt-pcr方法檢測(cè)gm20541基因在不同組織的表達(dá)情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計(jì)引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3'；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3'。以提取的cdna為模板，進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果見(jiàn)圖1中a和b，可以看出，通過(guò)rt-pcr方法檢測(cè)gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達(dá)。大腦中動(dòng)脈(MCA)為臨床上發(fā)生腦缺血損傷常見(jiàn)的部位之一。寧夏裸鼠動(dòng)物模型

通過(guò)阿霉素（Adriamycin，ADR）腹腔注射給藥（Adriamycin，ADR）試圖造成小鼠心衰。江蘇高脂高糖動(dòng)物模型服務(wù)

    應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子生物學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行的監(jiān)控外，各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括：（1）體液中各類(lèi)因子定性及定量檢測(cè)由于此類(lèi)檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類(lèi)小分子物質(zhì)，因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類(lèi)物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的試劑盒（比色法、比濁法等）方法對(duì)各類(lèi)生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。（2）組織病理、生理變化及免疫組化檢測(cè)常用的病理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記，以觀察細(xì)胞變化。除此之外，許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測(cè)組織纖維化病變，Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外，還可以通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免疫顯色檢測(cè)，達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。江蘇高脂高糖動(dòng)物模型服務(wù)