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上海小鼠動物模型實(shí)驗(yàn)室

來源: 發(fā)布時間:2024-02-21

    缺點(diǎn):該移植模型的原發(fā)出現(xiàn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生之間時間間隔短,不利于藥物藥效研究;且細(xì)胞為鼠源,與人類有一定的差異。2異種移植模型異種移植模型是將人類的細(xì)胞或組織移植入免疫缺陷型實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠,例如無胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般來說,免疫缺陷程度越高,成瘤性越好。的相關(guān)研究中,人源細(xì)胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft,CDX)模型和患者組織異種移植(patient-derivedxenograft,PDX)模型已得到廣泛應(yīng)用。CDX模型方法:將5×106的人A375黑色素瘤細(xì)胞皮下注射NOD/SCID小鼠腹側(cè)的雙側(cè),成功構(gòu)建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法:有研究者將93個新鮮的患者組織切成2×2×2mm3碎片的大小,皮下接種6周大的NOD/SCID雌性小鼠,建立PDX模型。優(yōu)點(diǎn):保留了病人的組織學(xué)和遺傳學(xué)特征,可模擬潰瘍狀態(tài)對人類黑色素瘤預(yù)后的影響。缺點(diǎn):此模型移植后的潛伏期長,連續(xù)傳代后鼠基質(zhì)被人類基質(zhì)替代,移植率可變,免疫系統(tǒng)受損,有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫細(xì)胞功能的缺乏。三、轉(zhuǎn)基因小鼠模型可以通過異位表達(dá)基因,引入特定的致突變或滅活抑制基因來對小鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)基因黑色素瘤模型的構(gòu)建。避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險。上海小鼠動物模型實(shí)驗(yàn)室

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    IgA腎病小鼠模型【目的】建立IgA腎病小鼠模型,并觀察模型的生化及病理指標(biāo)特點(diǎn)。【材料】1、酸化水:鹽酸調(diào)滅菌水;2、蓖麻油+CCl4:5:1配制;3、LPS:;4、血清白蛋白BSA:800mg/kg用量,滅菌水配制;【方法】小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導(dǎo)法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次,配制160mg/ml,灌胃100ul/只,持續(xù)8周;2、同時皮下注射蓖麻油和CCl4(5:1),1次/周,持續(xù)8周;3、分別于第6、8周以()尾靜脈注射LPS,1次/周;4、每兩周取24h尿液一次觀察尿蛋白及紅細(xì)胞;5、每日觀察精神、飲食、大小便,第9周處死,取血和腎、肝做相應(yīng)檢查;6、取尿液后2000r/min離心10min,取上清用全自動生化儀檢測尿蛋白肌酐比值,鏡下觀察尿沉渣中有無紅細(xì)胞。湖北基因敲除動物模型手術(shù)通過建立腦缺血-再灌注動物模型,模擬人類ICVD的病理過程。

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    痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠,雄性,周齡6~8W,體重:200~250g【方法】1、大鼠麻醉,顱頂脫毛備皮;2、大鼠腦定位儀固定大鼠,顱頂正中切口,長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫;3、縫線將皮膚左右分開固定,前囟后10mm、矢狀縫左側(cè);4、微量注射器移至開孔處修正骨孔,注射器垂直向顱內(nèi)插入,緩慢注射無水乙醇15ul,注射完移除注射器,棉球壓迫止血;5、縫合創(chuàng)口后維持25°體溫,等待蘇醒,觀察大鼠狀態(tài)。【觀察】術(shù)后3天模型大鼠攝食減少、右側(cè)肢體跛行、右前肢不負(fù)重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯,順時針繞圈前行,2周后癥狀減輕,大鼠于術(shù)后4周開始給予動物行為學(xué)觀察【檢測】HE檢測對比觀察腦組織是否出現(xiàn)細(xì)胞水腫,排列不規(guī)則,結(jié)構(gòu)紊亂,核固縮,染色體分布不均勻,變性壞死,核糖體消失,白質(zhì)軟化灶和空囊形成,小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤,星形膠質(zhì)細(xì)胞肥大、增生等病理表現(xiàn)。曠場測試(OpenFieldTest):實(shí)驗(yàn)用于評估大小鼠的活動性和探索性行為。動物被放置在一個較大的開放性場地內(nèi),然后記錄它們的運(yùn)動軌跡和停留時間。用來評估動物的活動性、焦慮程度、壓力反應(yīng)等。水迷宮測試。

    e:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì);scotopicamplitude:暗光測定峰值;flashintensity:閃光強(qiáng)度;a-wave:a波;b-wave:b波。圖6:光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測結(jié)果;圖中:a-b:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖;c:20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖;d:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì);e:不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì);f:20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計(jì)。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖7:視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果;小鼠年齡:4個月;os:outer-segment(外節(jié));is:inner-segment(內(nèi)節(jié));onl:outernuclearlayer(外核層);inl:innernuclearlayer(內(nèi)核層);圖中:a:視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果,外核層及內(nèi)核層均變薄;b:對不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計(jì)。圖8:視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。可以嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性。

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    表明在gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外節(jié)變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型小鼠;dapi(4',6-diamidino-2-phenylindole):細(xì)胞核染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚;rhodopsin:視紫紅質(zhì)抗體;merge:兩種顏色重疊。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚,下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者,按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者,均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實(shí)施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達(dá)情況。方法:分別提取小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna,然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據(jù)gm20541的cdna序列設(shè)計(jì)引物:gm20541-cdna-f:5’-tcggtctcatcttcattccc-3';gm20541-cdna-r:5’-ggaaggctctgttccggtat-3'。以提取的cdna為模板,進(jìn)行rt-pcr。擴(kuò)增后進(jìn)行電泳,結(jié)果見圖1。結(jié)果見圖1中a和b,可以看出,通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達(dá)。橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型。江蘇模式動物模型服務(wù)

可以簡化實(shí)驗(yàn)操作和樣品收集。上海小鼠動物模型實(shí)驗(yàn)室

    實(shí)驗(yàn)樣本分類實(shí)驗(yàn)一般采取樣本有:血液樣本、組織樣本和細(xì)胞樣本。通常,組織樣本采集后,應(yīng)立即用等滲溶液(PBS或生理鹽水)盡量把血液漂洗干凈(除非血液也是分析對象),用濾紙或紗布吸干,把樣本分切成幾分,每份的體積約2個黃豆大小,每份用一個管子裝。血液樣本的采集應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的要求,將會采取不同策略。血清樣本:全血中不加抗凝劑,血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。(全血標(biāo)本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min)血漿樣本:全血中加抗凝劑,血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。(可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,3000rpm/min離心15min)如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清,根據(jù)獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管,可避免反復(fù)凍融造成的檢測誤差。生化:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;ELISA:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;凝血實(shí)驗(yàn):只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;血常規(guī):只能選擇EDTA抗凝全血;如果要收集其中的白細(xì)胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管,防止表面抗原的丟失,或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。上海小鼠動物模型實(shí)驗(yàn)室

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