把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應)不大于8毫米，我習慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節可能有些同學沒注意到，就是ECL發光液要與HRP反應一分鐘后顯影效果才會更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。面神經受損而致面部表情肌群的運動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。寧夏基因敲除動物模型造模

    e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖b波統計；scotopicamplitude：暗光測定峰值；flashintensity：閃光強度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應視網膜電圖(erg)檢測結果；圖中：a-b：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖軌跡圖；d：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖a波統計；e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖b波統計；f：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖統計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜切片免疫組化染色結果；小鼠年齡：4個月；os：outer-segment(外節)；is：inner-segment(內節)；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內核層)；圖中：a：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜石蠟切片的h&e染色結果，外核層及內核層均變薄；b：對不同部位的gm20541敲除鼠視網膜外核層厚度統計。圖8：視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結果。云南皮下成瘤動物模型培養建立SD大鼠頸動脈損傷（結扎套管）模型。

    技術實現要素：本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用，采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型，該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發病過程及機制，并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的：方面，本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內，作為轉錄因子調控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多，對其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統發育疾病dandy-walker復合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關。此外，znf124被認為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動中承擔有重要功能。發明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關，對探索rp的致病機制有極大幫助。因此，深入研究znf124對視網膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。

    動物疾病模型在人類重大疾病研究和新藥創制等方面具有不可替代的重要作用和價值。與自發性疾病動物模型和環境誘導、物理因素、藥物誘導的疾病動物模型相比，手術模型操作復雜、技術門檻高，因此也存在相應的一些問題，如缺乏標準化流程、穩定性差、實驗室之間數據可比性較差。即便是同一個實驗室，重復性也是一個很大的挑戰。所以實現手術疾病模型的標準化、規范化和重復性仍然是該領域長期的目標。針對這一現狀，賽業生物利用多年積累的的堅實經驗、高效的團隊組建及管理經驗，歷經兩年籌備，打造了一支技術過硬的小鼠手術模型服務團隊，熟練掌握多種模型的制備，具備建立復雜及復合手術疾病模型的能力。我們以項目“可重復”作為金標準，對于客戶復雜的項目需求或文獻未見、少見的疾病模型，我們會與客戶緊密協作，認真理解和把握需求，制定科學合理的手術模型造模方案。希望我們提供的專業且穩定的手術模型服務可以節省您的時間和精力，讓您可以聚焦到科學創新性的工作上來。服務優勢1.以實驗“可重復”作為服務標準我們以實驗“可重復”作為金標準，對技術團隊進行大量的手術模型操作訓練，確保疾病模型多個批次之間數據的穩定性。2.一站式服務。用血管內線栓阻斷法制備大鼠 MCAO模型。已被腦血管病研究者接受和采用。

    表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4',6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據gm20541的cdna序列設計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3'；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3'。以提取的cdna為模板，進行rt-pcr。擴增后進行電泳，結果見圖1。結果見圖1中a和b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達。小鼠卵巢早衰POF模型。寧夏基因敲除動物模型造模

骨質疏松癥是以骨量減少及骨組織微觀結構為特征的一種全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于發生骨折。寧夏基因敲除動物模型造模

    首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模藥物，終只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據既往文獻報道可以獲得答案）、數量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆，因此需要提前購買足夠的動物）。動物購買的途徑、安置的地點，飲食管理（一般實驗室會有動物房，也可以從其他地方購買），動物免疫證明、倫理證明需要提前準備好。實驗相關的試劑和藥物：比如造模藥物和器械，動物干預所需藥物，陽物選擇及購買（有些藥物購買很困難，必須通過特殊程序才能買到）。如果涉及到有創操作，要提前準備好物（建議提前購買），手術器械。需要了解自身實驗平臺能完成哪些技術。寧夏基因敲除動物模型造模