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福建分子熒光壽命成像使用方法

來源: 發布時間:2023-03-02

熒光壽命通常來講是一定的,不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響,只與熒光團所處的微環境有關,因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環境中的許多物理參數如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術還可以同時獲得分子狀態和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫學領域有廣闊的應用前景。熒光壽命成像技術是通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。福建分子熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像可以干什么?熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對應的圖像區域。熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。佛山顯微熒光壽命成像哪里有賣熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。

生物發光與熒光壽命成像不同點:產生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發光水母一樣,生物發光與熒光成像在本質上,都是機體中特定的細胞或材料發出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發光與熒光壽命成像產生光子的過程和機制是完全不同的。生物發光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發光產生的光子和熒光壽命成像產生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發光水母一樣。除此之外,生物發光和熒光壽命成像都需要對目標細胞進行標記,讓細胞產生熒光素酶或者熒光蛋白。

熒光壽命成像技術用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團隊發展了熒光壽命成像技術(FLIM),表征DNA壓縮的動態過程,克服了以往方法的局限性。研究團隊提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環境折射率之間的逆二次方關系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉移(FRET)的技術獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動態變化過程。細胞培養結果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動態過程。熒光壽命成像技術是如何應用在生物醫學中的?

熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(Time-Correlated Single Photon Counting)實現。系統采用超短脈寬激光器作為激發光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測裝置(PMT)對熒光信號進行探測,再用TCSPC計數器對每一個光子進行計數,并將其放入一個對應的時間窗口,經過一定時間的統計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后,不同的時間通道累積下來的光子數目不同。以光子數對時間作圖可得到熒光衰減曲線。實現從百ps-ns-us的瞬態測試。綜上所述由于TCSPC系統,一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復頻率決定了系統的數據采集速度。重頻越高,采集速度越快,數據信噪比越好。熒光壽命成像可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析等。廣州多色熒光壽命成像操作步驟

熒光壽命成像不受染料濃度的影響;福建分子熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像:熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,FRET AB)或受體(敏化發射,FRET SE)熒光強度的技術。福建分子熒光壽命成像使用方法

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