熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導及調控，蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。在過去的十年中，光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展，共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。上海動物熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思？有什么用？假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr，則激發態衰減速率可表示為：其中n(t)表示時間t時激發態分子的數目，由此可得到激發態物種的單指數衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數：熒光強度正比于衰減的激發態分子數，因此可將上式改寫為：其中I0是時間為零時的熒光強度，τ為熒光壽命。也就是說熒光強度衰減到初始強度的1/e時所需要的時間就是該熒光物種在測定條件下的熒光壽命。事實上當熒光物質被激發后有些激發態分子立即返回基態，有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時才返回基態，這樣就形成了實驗測定的熒光強度衰減曲線。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響具有其他熒光成像技術無法代替的優異性能。上海顯微熒光壽命成像價格表熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。

熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合：對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼，產生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體（受體光漂白，FRET AB）或受體（敏化發射，FRET SE）熒光強度的技術。

熒光壽命成像（FLIM）的方法特別適合于體內診斷，因為它們是無創且無損的。因此，它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫學檢查。例如，該技術可以用于以下領域：皮膚的體內診斷：人類皮膚的多光子擴散層析成像結合了雙光子激發和非解掃檢測，因此，多光子FLIM可以提供組織層的光學切片圖像，深度可達100 μm。人皮膚細胞的體內雙光子成像是可能的，而不會損害組織的活力，可以從亞細胞分辨率重建三維結構。眼科檢查：眼科FLIM結合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發的功能。該方法非常靈敏，可以記錄人眼眼底（背景）的壽命圖像。通過這種方式，有可能及早發現眼部疾病，因為這些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來，這些引起內源性熒光團的熒光衰減參數的變化。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響，從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩；

影響熒光壽命成像測量的幾種因素：1．溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強度減弱，溫度升高1℃，熒光強度下降1～10%不等。測定時，溫度必須保持恒定。 2．PH值影響：PH 值影響物質的熒光，應選擇較佳PH制備樣品。 3．光分解對熒光測定的影響： 熒光物質吸收紫外可見光后，發生光化學反應，導致熒光強度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時，用較窄的激發光部分的狹縫，以減弱激發光。同時，用較寬的發射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環境中進行。熒光壽命通常來講是一定的，不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響。珠海單分子熒光壽命成像哪個牌子好

熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫學檢測有著重要的意義。上海動物熒光壽命成像使用方法

影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品的影響：1）當激發光照射高濃度樣品時，在激發光入口附近產生熒光，但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發生活性阻礙現象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發光譜的長波長端如果相互重疊，則發生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發光激發，檢出溶液的拉曼峰，然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。上海動物熒光壽命成像使用方法

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