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重慶分子熒光壽命成像哪家好

來源: 發布時間:2022-05-17

時域法熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測法(time-gated detection)、條紋相機測量法(streak-FLIM)、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術,同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號,該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器(time-amplitude converter,TAC),時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外,同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池,樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管,由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。此時,時幅轉換器根據累積電壓輸出一個數字信號并在多通道分析儀(multi-channel analyzer)的相應時間通道計入一個信號,表明檢測到壽命為該時間的一個光子。經過幾十萬次的重復后,不同的時間通道累積下來的光子數目不相同。熒光壽命是熒光基團在通過發射熒光光子返回基態之前在其激發態下保持平均多長時間的量度。重慶分子熒光壽命成像哪家好

門控探測法適用于單組分熒光強度衰減的測量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過在兩個不同延遲時刻開啟的相同寬度的門內記錄的熒光強度信息求得,通常情形下,在條件允許的情況下,采用多門控探測,即選取多個窗口獲取多幅圖像(通常為5~10幅)來反演壽命圖像。一般使用門控微通道板像增強器(MCP Intensifier)或者增強型CCD(Intensified CCD)相機,實現樣品的寬場(full-field)熒光壽命成像。通過在樣品受到超短光脈沖激發后的不同時刻(時間窗口)選通像增強器或CCD相機,獲得一組熒光強度圖像,然后利用公式,逐點計算出樣品上各點的熒光壽命并成像。上海三維熒光壽命成像怎么用熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數(TCSPC)。

熒光壽命成像技術及其在生物醫學中的應用:熒光分子的壽命就像熒光分子的激發光譜和發射光譜一樣是熒光分子的固有特性,隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發熒光,還可以結合熒光相關光譜對單分子實現熒光壽命相關光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫學領域有廣闊的應用前景。

受光學衍射極限的限制,熒光顯微技術的空間分辨率只能達到200納米左右,難以滿足生命科學研究的需要。而對于熒光壽命成像來說,其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴重。熒光壽命成像是一個新興的研究領域,尋求具有高度原創性的技術原理與方案,并率先解決熒光壽命成像在生命科學應用中存在的難題,具有重大的科學意義與應用價值。一種熒光壽命成像方法,所述方法包括下述步驟:對標記于樣品中的光開關染料分子進行稀疏激勵;激發樣品中被激勵的光開關染料分子,收集被激發的光開關染料分子所發射的光子并記錄光開關染料分子的熒光圖像,對熒光圖像中的光開關染料分子進行質心定位;對在質心定位處接收到的光子進行計數,確定被激發的光開關染料分子的熒光壽命;結合得到的光開關染料分子的質心定位結果和熒光壽命,構建熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術有兩種:時間域和頻率域。

與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環境變化,更重要的是其測量數據準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統的應用范圍。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。重慶開放式熒光壽命成像制造

熒光壽命成像基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。重慶分子熒光壽命成像哪家好

熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應用范圍.目前的一個研究方向是,發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。重慶分子熒光壽命成像哪家好

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